熒光-PCR法是利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著反應循環數的增加，最終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進入平臺期。將已知濃度的標準品梯度稀釋進行PCR，按照起始DNA量由多到少的順序等間隔得到一系列擴增曲線。Ct值與起始模板數的對數值之間存在線性關系，可以制作標準曲線。未知濃度的樣品也得到Ct值，代入標準曲線，就可以求出未知樣品的起始模板量。